Определение чувствительности к антибиотикам диско-диффузионным методом (ДДМ)

Для определения чувствительности выделенного микроорганизма к антибиотикам может использоваться несколько методик. В одной из них используют бумажные диски, пропитанные раствором определенного антибиотика. Выделенный возбудитель заново засеивают на питательную среду, затем на поверхность помещают диски. После инкубации в термостате вокруг дисков, пропитанных антибиотиком, к которому чувствительна бактерия, будет так называемая зона замедления, или отсутствия, роста. По диаметру этой зоны оценивают степень чувствительности. При другом методе исследуемый антибиотик изначально добавляется в питательную среду в разных концентрациях (разведениях), после инкубации можно определить минимальную концентрацию препарата, которая будет подавлять рост бактерий, – на этой среде культура возбудителя не вырастет. И, наконец, третий – метод Е-тестов – состоит в использовании специальных тестовых полосок, которые на своем протяжении пропитаны антибиотиком в разных концентрациях. Процесс аналогичен исследованию с помощью дисков, только при Е-тесте после инкубации зона отсутствия роста будет вокруг участка полоски с минимальной подавляющей концентрацией лекарственного средства.

Помимо антибиотиков для лечения бактериальных инфекций можно применять бактериофаги – вирусы, избирательно поражающие только бактериальные клетки. Бактериофаги специфичны к определенному виду бактерии (например, стафилококковый бактериофаг не будет уничтожать другие бактерии, кроме стафилококков). Препараты бактериофагов производятся фармацевтической промышленностью. Но некоторые бактерии обладают устойчивостью к бактериофагам, кроме того, являясь биологическим препаратом, бактериофаг при нарушениях технологии производства и хранения может потерять свою эффективность. Поэтому перед назначением препарата бактериофага необходимо лабораторно подтвердить чувствительность к нему выделенного возбудителя. Для этого из выделенной чистой культуры готовят бактериальную суспензию, которую наносят на новую питательную среду. Через несколько минут, после подсыхания культуры, на поверхность наносят по одной капле каждого исследуемого жидкого препарата бактериофага так, чтобы они не сливались друг с другом. После того как капли впитаются в среду, чашки убирают в термостат и инкубируют при оптимальной для микроорганизмов температуре (обычно 37 градусов). В экстренных случаях предварительную оценку результата можно делать уже через 6-8 часов, окончательный же результат будет известен через 24 часа. В случае высокой чувствительности бактерии к фагу на месте капли появится стерильное пятно – так называемая негативная колония, если же микроорганизм не чувствителен к бактериофагу зоны лизиса не будет совсем. Может быть и так, что часть бактерий сохранила чувствительность к фагу, а другая к нему резистентна, тогда на месте негативной колонии бактериофага будут отдельные колонии микроорганизма. Такой результат говорит о слабой чувствительности возбудителя к препарату фага.