Бактериологическое исследование раневого отделяемого на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы

Одним из самых частых видов травматических повреждений являются раны. Загрязнение раневого дефекта в процессе ранения (контакт с землей, пылью, укусы животных и т. п.), наличие в ране закрытых полостей, инородных тел и омертвевших тканей способствуют развитию в ней раневой инфекции. Развитие инфекции в ране не только замедляет ее заживление, но и создает риск распространения инфекционного процесса в организме. Поэтому при появлении объективных признаков развития гнойно-воспалительного процесса в ране и прилегающих к ней тканях целесообразно проведение микробиологического исследования – посева отделяемого раны в целях верификации возбудителя и при его обнаружении определения его чувствительности к противомикробным препаратам для назначения эффективного лечения. К симптомам раневой инфекции можно отнести медленное заживление раны, покраснение, отечность, а также местное повышение температуры кожи вокруг раны, длительное отделение из раны по дренажу жидкости, отделение гноя, лихорадку.

Взятие материала для микробиологического исследования должно производиться медицинским работником. Предварительно кожу вокруг раны обрабатывают раствором антисептика, при этом попадание антисептика непосредственно в рану недопустимо, так как неизбежно повлияет на результаты исследования. При наличии обильного количества некротических масс или гноя их удаляют стерильной салфеткой. Для взятия материала используется специальный зонд-тампон, который прокатывают по раневой поверхности, в процессе чего тампон пропитывается раневым отделяемым. Затем зонд помещают в пробирку с транспортной средой, плотно закрывают пробкой и доставляют в лабораторию. При наличии в ране дренажей отделяемое из них забирают одноразовым стерильным шприцем, для исследования достаточно 1-2 мл. Полученную жидкость помещают в пробирку с транспортной средой и плотно закрывают пробкой. Также можно пропитать отделяемым из дренажа стерильный зонд-тампон, дальнейшая техника аналогична описанной выше. Использование пробирок с транспортной средой чрезвычайно важно для того, чтобы попавшие в исследуемый материал микроорганизмы не погибли в процессе длительной доставки в лабораторию. Использование обычных стерильных пробирок допустимо, только когда лаборатория располагается в непосредственной близости и возможно обеспечить немедленную доставку туда полученного материала.

Доставленный в бактериологическую лабораторию материал используют для посева на специальные питательные среды – универсальные либо подобранные для определенной группы микроорганизмов, если есть подозрение на определенного возбудителя. Посевы инкубируют при температуре 37 градусов в течение суток и оценивают рост бактериальных колоний. При наличии роста выделенную культуру исследуют под микроскопом и с учетом предполагаемого вида микроорганизма пересеивают на другую среду для выделения чистой культуры. Полученную чистую культуру используют для верификации вида бактерии (с учетом исследования под микроскопом, окраски, использования специфических антител) и определения чувствительности к противомикробным лекарственным препаратам. При отсутствии роста колоний микроорганизмов в течение пяти суток емкости со средами выбрасываются и констатируется отрицательный результат посева.

Для определения чувствительности выделенного микроорганизма к антибиотикам может использоваться несколько методик. В одной из них используют бумажные диски, пропитанные раствором определенного антибиотика. Выделенный возбудитель заново засеивают на питательную среду, затем на поверхность помещают диски. После инкубации в термостате вокруг дисков, пропитанных антибиотиком, к которому чувствительна бактерия, будет так называемая зона замедления, или отсутствия, роста. По диаметру этой зоны оценивают степень чувствительности. При другом методе исследуемый антибиотик изначально добавляется в питательную среду в разных концентрациях (разведениях), после инкубации можно определить минимальную концентрацию препарата, которая будет подавлять рост бактерий, – на этой среде культура возбудителя не вырастет. И, наконец, третий – метод Е-тестов – состоит в использовании специальных тестовых полосок, которые на своем протяжении пропитаны антибиотиком в разных концентрациях. Процесс аналогичен исследованию с помощью дисков, только при Е-тесте после инкубации зона отсутствия роста будет вокруг участка полоски с минимальной подавляющей концентрацией лекарственного средства.

Помимо антибиотиков для лечения бактериальных инфекций можно применять бактериофаги – вирусы, избирательно поражающие только бактериальные клетки. Бактериофаги специфичны к определенному виду бактерии (например, стафилококковый бактериофаг не будет уничтожать другие бактерии, кроме стафилококков). Препараты бактериофагов производятся фармацевтической промышленностью. Но некоторые бактерии обладают устойчивостью к бактериофагам, кроме того, являясь биологическим препаратом, бактериофаг при нарушениях технологии производства и хранения может потерять свою эффективность. Поэтому перед назначением препарата бактериофага необходимо лабораторно подтвердить чувствительность к нему выделенного возбудителя. Для этого из выделенной чистой культуры готовят бактериальную суспензию, которую наносят на новую питательную среду. Через несколько минут, после подсыхания культуры, на поверхность наносят по одной капле каждого исследуемого жидкого препарата бактериофага так, чтобы они не сливались друг с другом. После того как капли впитаются в среду, чашки убирают в термостат и инкубируют при оптимальной для микроорганизмов температуре (обычно 37 градусов). В экстренных случаях предварительную оценку результата можно делать уже через 6-8 часов, окончательный же результат будет известен через 24 часа. В случае высокой чувствительности бактерии к фагу на месте капли появится стерильное пятно – так называемая негативная колония, если же микроорганизм не чувствителен к бактериофагу зоны лизиса не будет совсем. Может быть и так, что часть бактерий сохранила чувствительность к фагу, а другая к нему резистентна, тогда на месте негативной колонии бактериофага будут отдельные колонии микроорганизма. Такой результат говорит о слабой чувствительности возбудителя к препарату фага.

Специальной подготовки не требуется.

• При наличии симптомов, позволяющих заподозрить раневую инфекцию: медленном заживлении раны, покраснении, отечности, а также местной гипертермии кожи вокруг раны, длительном отделении из раны по дренажу жидкости, отделении гноя, лихорадке.

Отрицательный результат — патогенная флора не выявлена — отсутствие роста микроорганизмов.

Положительный результат (указывается выявленная флора) — указывается вид выделенного микроорганизма. Следует отметить, что обитающие в норме в организме человека так называемые условно-патогенные микроорганизмы тоже могут быть выделены в процессе микробиологического исследования, обычно они не считаются возбудителями.

Чувствительность к антибиотикам определяется, если выявлена патогенная или условно-патогенная флора.

Чувствительность к бактериофагам. Обязательно указывается название бактериофага, производитель, серия, дата выпуска и срок годности препарата.