Фенотипирование лимфоцитов (основные субпопуляции) — CD3, CD4, CD8, CD19, CD16,56

В современном понимании иммунный статус человека – это совокупность лабораторных показателей, характеризующих ко¬личественную и функциональную активность клеток иммунной системы в данный момент времени. Оценка иммунного статуса проводится с помощью иммунологического лабораторного обследования – иммунограммы. Иммунограмма крови не отража¬ет избирательно состояние патологически измененного органа или системы, но позволяет оценить иммунную систему в целом (сум¬марный эффект изменения активности иммунной системы в ответ на чужеродный антиген).

Определение клеточного состава (иммунофенотипирование) лимфоцитов крови – основной компонент в оценке иммунного статуса – выполняется методом проточной цитофлюориметрии.

Иммунофенотипирование – это характеристика клеток, полученная при помощи моноклональных антител или каких-либо других зондов, позволяющих судить об их типе и функциональном состоянии по наличию того или иного набора клеточных маркеров.

Иммунофенотипирование лейкоцитов заключается в обнаружении на их поверхности маркеров дифференциации, или CD-антигенов. Лейкоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития.

CD-антигены (англ. cluster of differentiation antigens) – это антигены на поверхности клеток, маркеры, отличающие одни типы клеток от других. Дифференциации этих антигенов изучены и стандартизованы, им присвоены определенные номера. CD могут быть распознаны с помощью соответствующих моноклональных антител. Используя флюоресцентно меченные моноклональные антитела, связывающиеся с определенными CD, можно с помощью метода проточной цитометрии рассчитать содержание лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям.

В основе проточной цитофлюориметрии лежит фотометрическое и флюоресцентное измерение отдельных клеток, пересекающих одна за другой вместе с потоком жидкости луч монохроматического света, обычно света лазера.

Метод позволяет не только определить количественное соотношение основных популяций лимфоцитов –

• Т-лимфоциты (CD3+CD19-),
• Т-хелперы/индукторы (CD3+CD4+CD45+),
• Т-цитотоксические лимфоциты (Т-ЦТЛ) (CD3+CD8+CD45+),
• истинные натуральные "киллеры" (NK-клетки) (CD3-CD56+CD45+),
• В-лимфоциты (CD19+CD3-), –

но и оценить малые клеточные популяции, а также изучить их функциональную активность:

• Т-лимфоциты, экспрессирующие маркеры NK-клеток (Т-NK-клетки) (CD3+CD56+CD45+),
• NK-клетки цитолитические (CD3-CD16+(orhigh) CD56dimCD45+),
• NK-клетки цитокинпродуцирующие (CD3-CD16-(orlow)CD56brightCD45+),
• NK-клетки, экспрессирующие альфа-цепь антигена CD8 (CD3-СD8+CD45+),
• активированные В-лимфоциты (CD3-CD25+CD45+),
• активированные Т-лимфоциты (CD3+HLA-DR+CD45+) и активированные цитотоксические лимфоциты (CD8+HLA-DR+CD45+),
• В-лимфоциты и активированные NK-клетки (CD3-HLA-DR+CD45+),
• активированные Т-лимфоциты, экспрессирующие альфа-цепь рецептора ИЛ-2 (CD3+CD25+CD45+),
• регуляторные Т-хелперные клетки (CD4+CD25brightCD127negCD45+), выполняющие иммуносупрессорную функцию.

Такое всестороннее изучение клеточного состава лимфоцитов в совокупности с результатами других тестов, входящих в состав исследования, позволяет установить более тонкие механизмы иммунологических нарушений. Они про¬водятся для уточнения степени и глубины поражения иммунной системы и подбора препарата для проведения последующей адек¬ватной иммунокорригирующей терапии, оценки эффективности проводимого лечения, определения прогноза течения заболевания.

В данном варианте исследования, помимо оценки основных субпопуляций лимфоцитов, уровня циркулирующих иммунных комплексов, основных классов иммуноглобулинов периферической крови, упор делается на расширенный анализ NK-клеток (Natural killers – "натуральные киллеры"), а также оценку активированных Т-лимфоцитов (CD3+HLA-DR+CD45+) и активированных цитотоксических лимфоцитов (CD8+HLA-DR+CD45+), отвечающих за противовирусный иммунитет. Анализ вышеперечисленных популяций клеток поможет понять, адекватно ли иммунная система реагирует на вирусную инфекцию и нуждается ли пациент в иммуностимулирующей терапии.

* Результаты исследования выдаются с заключением врача – аллерголога-иммунолога, доктора медицинских наук.

Набор тестов:

• Клинический анализ крови (c лейкоцитарной формулой)
• Суммарные иммуноглобулины класса A в сыворотке (IgA)
• Суммарные иммуноглобулины класса G в сыворотке (IgG)
• Суммарные иммуноглобулины класса M в сыворотке (IgM)
• Состояние клеточного звена иммунитета
• Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)

• Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
• Не принимать пищу в течение 12 часов до исследования.
• Полностью исключить прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед исследованием (по согласованию с врачом).
• Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 24 часов до исследования.
• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Исследование рекомендовано для комплексного обследования пациентов, входящих в группу риска с инфекционным иммунопатологическим синдромом:

• частые ОРВИ, хронические инфекции ЛОР-органов: гнойные синуситы, отиты, периодически встречающиеся лимфадениты, вирусные пневмонии с тенденцией к рецидивированию;
• урогенитальные инфекции;
• рецидивирующий герпес различной локализации;
• гастроэнтеропатия с хронической диареей неясной этиологии, дисбактериозом;
• длительный субфебрилитет, лихорадка неясной этиологии;
• генерализованные инфекции: сепсис, гнойные менингиты и т.д.

Уровень различных клеточных популяций лимфоцитов может повышаться или понижаться при различных патологических процессах в организме, таких как инфекции, аутоиммунные и онкологические заболевания, иммунодефициты, в постоперационном периоде, при трансплантации органов.

Ниже представлена таблица с клиническими ситуациями, которые могут приводить к изменениям в субпопуляционном составе лимфоцитов.

К каждой иммунограмме прилагается письменное заключение врача-иммунолога.